AZ1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406801

Visão geral

OAZ1 humano codifica a antizima 1 (AZ1), um importante regulador negativo do metabolismo das poliaminas que limita os níveis intracelulares de putrescina, espermidina e espermina ao se ligar à ornitina descarboxilase (ODC) e promover sua degradação proteassomal independente de ubiquitina. Ao restringir a biossíntese e o transporte de poliaminas, a AZ1 influencia processos centrais, incluindo a progressão do ciclo celular, a tradução e programas de crescimento adaptativo ao estresse. A expressão de OAZ1 é rigidamente controlada por um frameshift ribossômico +1 responsivo a poliaminas, formando um circuito de feedback que estabiliza a homeostase de poliaminas. A desregulação do controle de poliaminas envolvendo OAZ1 tem sido associada a estados de sinalização proliferativa e a dependências metabólicas alteradas observadas no câncer e em outras patologias relacionadas ao crescimento.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AZ1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene OAZ1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do OAZ1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do OAZ1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AZ1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de OAZ1 para a investigação da sinalização de AZ1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) OAZ1 críticos para a função AZ1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos OAZ1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo AZ1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo AZ1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus OAZ1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo AZ1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR AZ1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia OAZ1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo OAZ1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.