AWP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425748

Descripción general

Zfand6 codifica AWP1, una proteína que contiene un dominio AN1 tipo “zinc finger”, implicada en la regulación dependiente de ubiquitina del recambio de proteínas y de la señalización de estrés celular. AWP1 se ha relacionado con la modulación de vías inflamatorias y de la inmunidad innata, incluida la señalización de NF-κB, mediante interacciones con sustratos ubiquitinados y con componentes de redes de ligasas de ubiquitina. En sistemas murinos, la expresión y función de Zfand6 se estudian en el contexto de la proteostasis, la transducción de señales y las respuestas celulares a citocinas y al estrés. La desregulación del control mediado por ubiquitina y de la señalización inflamatoria es ampliamente relevante para los mecanismos subyacentes de la biología del cáncer, la neurodegeneración y la patología impulsada por el sistema inmunitario, lo que convierte a Zfand6 en un nodo útil para el análisis de rutas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AWP1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Zfand6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Zfand6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Zfand6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AWP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Zfand6 para la investigación de la señalización de AWP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Zfand6 críticos para la función de AWP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Zfand6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AWP1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AWP1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Zfand6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AWP1 (m) y el plásmido HDR AWP1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Zfand6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Zfand6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.