Particules Lentivirales d'Activation (h) Attractin: sc-406420-LAC

ATRN code l’attractine, une glycoprotéine transmembranaire de type I impliquée dans les interactions entre cellules immunitaires et la communication extracellulaire, en soutenant des événements d’adhésion cellulaire et de liaison de ligands qui influencent l’activation et le trafic des leucocytes. L’attractine participe à la régulation de la signalisation inflammatoire et à l’organisation de la synapse immunologique, et a été étudiée dans le cadre de processus neuro-immunitaires ainsi que de la biologie liée aux mélanocortines. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ATRN ont été associées à une dérégulation immunitaire et à des phénotypes neurologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des voies reliant inflammation, contact cellule–cellule et homéostasie tissulaire. Dans des modèles cellulaires humains, ATRN constitue un nœud exploitable pour disséquer les réseaux de récepteurs de surface et les programmes transcriptionnels en aval.

Les particules d'activation lentivirales Attractin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ATRN dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Attractin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ATRN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Attractin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ATRN ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.