Particules Lentivirales d'Activation (h) ATR: sc-400335-LAC

ATR (ataxie-télangiectasie et Rad3-related) code une kinase sérine/thréonine de type PI3K qui agit comme capteur central du stress réplicatif et de l’ADN simple brin, en activant une signalisation de checkpoint afin de préserver la stabilité du génome. ATR est recrutée via ATRIP et stimulée par TOPBP1 et ETAA1 pour phosphoryler des substrats clés tels que CHK1, coordonnant la progression en phase S, la stabilisation des fourches de réplication et le choix des voies de réparation de l’ADN. Grâce à des interactions avec les facteurs de recombinaison homologue et les complexes de protection des fourches, la signalisation ATR limite les cassures double brin associées à la réplication et contrôle l’arrêt du cycle cellulaire en conditions de stress génotoxique. Une activité dérégulée de la voie ATR est associée à l’instabilité chromosomique et est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie des cancers, des troubles du neurodéveloppement et des syndromes impliquant une réponse aux dommages de l’ADN déficiente.

Les particules d'activation lentivirales ATR (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ATR dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ATR (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ATR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ATR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ATR ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.