ATGL Double Nickase Plasmid (m): sc-426224-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATGL Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATGL Double-Nickase-Plasmid (m) und ATGL Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pnpla2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ATGL: sc-365278
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATGL Double Nickase Plasmid (m) | sc-426224-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATGL Double Nickase Plasmid (m2) | sc-426224-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Pnpla2** kodiert die adipöse Triglyceridlipase (ATGL), ein geschwindigkeitsbestimmendes Enzym, das die Hydrolyse von Triacylglycerolen an Lipidtröpfchen einleitet und dadurch Fettsäuren sowie Diacylglycerol freisetzt. Die ATGL-Aktivität koordiniert die zelluläre Energiebilanz, indem sie Substrate für die mitochondriale β‑Oxidation bereitstellt und den Umsatz von Lipidtröpfchen reguliert, häufig im Zusammenspiel mit Kofaktoren wie **ABHD5/CGI‑58**. Durch ihre zentrale Rolle im Abbau neutraler Lipide beeinflusst ATGL die metabolische Signalübertragung und die Lipidhomöostase in Fettgewebe, Leber, Herz und Skelettmuskel. Eine Fehlregulation von Pnpla2/ATGL ist mit pathologischer Lipidakkumulation und verändertem Energiestoffwechsel verbunden und stellt daher ein relevantes Ziel dar, um Lipidspeichererkrankungen und metabolische Stressantworten in vivo und in kultivierten Maus-Zellen zu untersuchen.
ATGL Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pnpla2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pnpla2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pnpla2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pnpla2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.