Plasmide Double Nickase (m) ATGL: sc-426224-NIC

Le gène murin *Pnpla2* code l'adipose triglyceride lipase (ATGL), une enzyme limitante qui initie l'hydrolyse des triacylglycérols au niveau des gouttelettes lipidiques afin de libérer des acides gras et du diacylglycérol. L'activité d'ATGL coordonne l'équilibre énergétique cellulaire en fournissant des substrats pour la β‑oxydation mitochondriale et en modulant le renouvellement des gouttelettes lipidiques, souvent de concert avec des cofacteurs tels qu'ABHD5/CGI‑58. Par son rôle central dans le catabolisme des lipides neutres, ATGL influence la signalisation métabolique et l'homéostasie lipidique dans le tissu adipeux, le foie, le cœur et le muscle squelettique. La dérégulation de *Pnpla2*/ATGL est associée à une accumulation lipidique pathologique et à des altérations du métabolisme énergétique, ce qui en fait une cible pertinente pour l'étude, in vivo et dans des cellules murines cultivées, des maladies de stockage lipidique et des réponses au stress métabolique.

ATGL Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pnpla2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pnpla2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pnpla2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pnpla2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.