Plasmide CRISPR d'Activation (h) Atg9b: sc-406894-ACT

Le gène humain **ATG9B** code **Atg9b**, une protéine transmembranaire à passages multiples qui soutient la biogenèse des autophagosomes en coordonnant l’acheminement de membranes vers les sites de formation des autophagosomes. **ATG9B** fonctionne au sein des voies centrales de la macroautophagie et s’articule avec le trafic vésiculaire, le contrôle qualité des organites et des réponses adaptatives au stress qui influencent la protéostasie et le métabolisme cellulaire. Une autophagie dérégulée et des perturbations du réseau **ATG** ont été associées à la biologie tumorale, à la neurodégénérescence et à des processus inflammatoires, faisant d’**ATG9B** un nœud utile pour des études mécanistiques du flux autophagique et de la dynamique membranaire. Les applications de recherche incluent la cartographie des relations d’épistasie de la voie avec la signalisation **ULK1–BECN1**, l’exploration de contextes d’autophagie sélective et l’établissement de liens entre l’expression d’**ATG9B** et des phénotypes tels que la survie en situation de stress nutritif.

Atg9b Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATG9B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Atg9b Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATG9B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATG9B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Atg9b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATG9B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Atg9b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Atg9b dans les cellules tumorales présentant une expression de ATG9B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.