Atg2B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429358

Descripción general

Atg2b codifica la proteína relacionada con la autofagia Atg2B, un factor conservado necesario para la biogénesis y la maduración de los autofagosomas. Atg2B participa en el manejo de lípidos en sitios de contacto entre membranas, favoreciendo la expansión del fagóforo y un flujo autofágico eficiente, procesos que integran la detección de nutrientes y el control de calidad de los orgánulos. La alteración de las vías de autofagia en las que interviene Atg2B puede perturbar la proteostasis, la homeostasis mitocondrial y la señalización inmunitaria innata, lo que vincula este gen con mecanismos relevantes para la neurodegeneración, la biología del cáncer y fenotipos inflamatorios en modelos experimentales. En sistemas murinos, Atg2b se estudia ampliamente por su papel en la adaptación al estrés celular y en el recambio de macromoléculas dañadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Atg2B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Atg2b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Atg2b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Atg2b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Atg2B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Atg2b para la investigación de la señalización de Atg2B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Atg2b críticos para la función de Atg2B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Atg2b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Atg2B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Atg2B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Atg2b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Atg2B (m) y el plásmido HDR Atg2B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Atg2b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Atg2b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.