Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ataxin-2: sc-403590-ACT

ATXN2 code l’ataxine-2, une protéine liant l’ARN qui s’associe aux polyribosomes et aux granules de stress afin de réguler la stabilité des ARNm, la traduction et les réponses cellulaires au stress. Par ses interactions avec des facteurs du métabolisme de l’ARN et la machinerie de contrôle de la traduction, l’ataxine-2 influence la protéostasie et des programmes de signalisation qui façonnent l’homéostasie neuronale et métabolique. Des altérations de la fonction et de l’expression d’ATXN2 sont impliquées dans des phénotypes neurodégénératifs, notamment l’ataxie spinocérébelleuse de type 2, ainsi que dans la modification du risque génétique de la sclérose latérale amyotrophique, reliant cette protéine à des voies qui gouvernent l’intégrité synaptique et la traduction adaptative au stress. En tant que nœud reliant le traitement de l’ARN et la biologie de la réponse au stress, ATXN2 est largement étudié dans des modèles de neurotoxicité, d’agrégation protéique et d’homéostasie cellulaire.

Ataxin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATXN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ataxin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATXN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATXN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ataxin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATXN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ataxin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ataxin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATXN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.