Plasmide Double Nickase (m) ASXL1: sc-432808-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ASXL1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ASXL1 Double Nickase (m) et le plasmide ASXL1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Asxl1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ASXL1 Antibody (6E2): sc-293204
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ASXL1 | sc-432808-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ASXL1 | sc-432808-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Asxl1 code pour ASXL1, un régulateur associé à la chromatine qui coopère avec les complexes des groupes Polycomb et Trithorax afin de façonner les états épigénétiques et les programmes transcriptionnels dans les cellules de souris. ASXL1 influence la dynamique des modifications des histones, notamment des voies liées à la méthylation de H3K27 et, plus largement, au remodelage de la chromatine, affectant ainsi la spécification de lignée, la prolifération et la différenciation. La perturbation du contrôle épigénétique médié par ASXL1 modifie les réseaux d’expression génique impliqués dans le développement hématopoïétique et le maintien des cellules souches. La dérégulation d’ASXL1 est largement étudiée dans le contexte des mécanismes associés aux hémopathies malignes myéloïdes et de la biologie du développement, ce qui souligne sa pertinence pour modéliser des défauts transcriptionnels et chromatiniens liés aux maladies.
ASXL1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Asxl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Asxl1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Asxl1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Asxl1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.