Plasmide Double Nickase (h) ASL: sc-403083-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ASL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ASL Double Nickase (h) et le plasmide ASL Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ASL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ASL Antibody (B-1): sc-166787
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ASL | sc-403083-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ASL | sc-403083-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ASL humaine code l’argininosuccinate-lyase, une enzyme cytosolique qui catalyse le clivage réversible de l’argininosuccinate en arginine et fumarate, reliant le cycle de l’urée au métabolisme énergétique cellulaire via le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). En favorisant l’élimination de l’azote et la disponibilité en arginine, l’ASL influence l’homéostasie des acides aminés ainsi que, en aval, la biologie de l’oxyde nitrique par ses effets sur l’apport en arginine. L’activité de l’ASL est essentielle à la détoxification hépatique de l’ammoniac et à une coordination métabolique plus large entre les tissus. Une altération de la fonction de l’ASL est associée à un dysfonctionnement du cycle de l’urée et à des phénotypes métaboliques liés à l’hyperammoniémie, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du métabolisme de l’azote et du dialogue mitochondrie–cytosol.
ASL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ASL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ASL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ASL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ASL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.