Plasmide CRISPR d'Activation (h) ASAHL: sc-407543-ACT

Le gène humain **NAAA** code la **N-acyléthanolamine acide amidase (ASAHL)**, une enzyme lysosomale qui hydrolyse des éthanolamides d’acides gras tels que la palmitoyléthanolamide en leurs acides gras correspondants et en éthanolamine. En contrôlant les pools intracellulaires de N-acyléthanolamines bioactives, l’ASAHL influence des réseaux de signalisation lipidique qui interfèrent avec la régulation de l’inflammation, les réponses au stress cellulaire et la fonction des cellules immunitaires. L’activité de NAAA/ASAHL est couramment étudiée dans le contexte de la neuro-inflammation, de la biologie de la douleur et de l’inflammation métabolique, où des modifications du renouvellement des médiateurs lipidiques peuvent moduler le “tonus” des voies sans changer la biosynthèse en amont. Son rôle associé au lysosome la rend également pertinente pour l’étude de l’homéostasie des organites et du catabolisme lipidique dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

ASAHL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NAAA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ASAHL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NAAA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NAAA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ASAHL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NAAA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ASAHL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ASAHL dans les cellules tumorales présentant une expression de NAAA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.