Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARX: sc-402055-ACT

ARX (aristaless related homeobox) code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule des programmes d’expression génique nécessaires à la prolifération des progéniteurs neuronaux, à la différenciation des interneurones et à la régionalisation lors du développement du télencéphale. Grâce à une liaison à l’ADN spécifique de séquence et à des interactions avec des complexes de co‑régulation, ARX coordonne des réseaux transcriptionnels qui influencent la migration et la maturation des neurones. Une activité d’ARX dérégulée est associée à des troubles neurodéveloppementaux, notamment la déficience intellectuelle liée à l’X et des phénotypes associés à l’épilepsie, ce qui en fait une cible fréquente des études sur la régulation génique au cours du développement. Dans des modèles cellulaires humains, ARX constitue un nœud expérimental pertinent pour étudier comment le dosage et la temporalité d’action d’un facteur de transcription orientent les décisions de lignée.

ARX Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARX Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARX. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARX au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARX dans les cellules tumorales présentant une expression de ARX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.