Particules Lentivirales d'Activation (h) ARMCX1: sc-407214-LAC

ARMCX1 (armadillo repeat containing, X-linked 1) code une protéine à répétitions armadillo impliquée dans le trafic intracellulaire et la dynamique mitochondriale, et joue un rôle dans la coordination des interactions avec le cytosquelette ainsi que dans le positionnement des organites. En tant que membre de la famille ALEX/ARMCX, ARMCX1 est associé à l’homéostasie neuronale et métabolique, en influençant des processus tels que le transport mitochondrial et la réponse au stress. Des altérations de l’expression d’ARMCX1 ont été rapportées dans des études transcriptomiques portant sur de multiples contextes tumoraux et des jeux de données pertinents pour la neurologie, ce qui étaye son utilisation comme point d’entrée moléculaire pour étudier des voies liées à la prolifération, à l’apoptose et à l’adaptation cellulaire. Ces caractéristiques font d’ARMCX1 une cible utile pour disséquer des réseaux de régulation qui couplent l’organisation subcellulaire à des phénotypes associés aux maladies dans des modèles de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ARMCX1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ARMCX1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ARMCX1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ARMCX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ARMCX1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ARMCX1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.