Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-1 (m): sc-423198

Présentation

Aurka code la sérine/thréonine kinase ARK-1 (Aurora kinase A), un régulateur central de la maturation du centrosome, de l’entrée en mitose et de l’assemblage du fuseau bipolaire dans les cellules de souris. ARK-1 coordonne des événements de phosphorylation qui soutiennent la dynamique des microtubules et la ségrégation des chromosomes, en agissant au sein de réseaux de contrôle du cycle cellulaire incluant la progression mitotique dépendante de PLK1 et de CDK1 ainsi que la surveillance des points de contrôle. Une activité d’Aurka dérégulée perturbe la stabilité génomique et a été associée à des phénotypes de prolifération anormale pertinents pour la transformation oncogénique et l’aneuploïdie. Par conséquent, Aurka est largement utilisé comme nœud mécanistique pour étudier la fidélité de la mitose, les défauts d’assemblage du fuseau et les réponses au stress liées au cycle cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aurka dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aurka, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aurka à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARK-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aurka pour l'étude de la signalisation de ARK-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aurka essentiels à la fonction de ARK-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aurka pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ARK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aurka. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARK-1 plasmide HDR (m) et le ARK-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aurka pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aurka définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.