Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARH (h): sc-406114
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ARH Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ARH, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ARH Antibody (F-11): sc-514106
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARH (h) | sc-406114 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
LDLRAP1 code pour la protéine adaptatrice ARH, un composant clé de l’endocytose médiée par la clathrine, qui relie le récepteur des LDL (LDLR) au complexe AP‑2 et au manteau de clathrine afin de permettre son internalisation à la membrane plasmique. ARH reconnaît les motifs NPXY du LDLR et coordonne la sélection du cargo, la formation des vésicules et le trafic du récepteur à travers les compartiments endosomaux. Cette voie est centrale pour l’entrée cellulaire du cholestérol et l’homéostasie des lipoprotéines, reliant la fonction de LDLRAP1 à la régulation des réseaux du métabolisme lipidique. Les variants avec perte de fonction de LDLRAP1 sont associés à l’hypercholestérolémie autosomique récessive, faisant d’ARH un point d’entrée utile pour analyser les défauts d’internalisation du LDLR et leurs conséquences sur la signalisation en aval.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LDLRAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LDLRAP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LDLRAP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARH.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LDLRAP1 pour l'étude de la signalisation de ARH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de LDLRAP1 essentiels à la fonction de ARH
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LDLRAP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ARH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ARH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LDLRAP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ARH plasmide HDR (h) et le ARH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LDLRAP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LDLRAP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.