Plasmide CRISPR d'Activation (h) Arc: sc-400231-ACT

ARC code pour la protéine Arc (activity-regulated cytoskeleton-associated protein), produit d’un gène à expression immédiate (immediate-early gene) qui couple l’activité neuronale au remodelage synaptique. Arc régule l’endocytose des récepteurs AMPA, la dynamique du cytosquelette d’actine et la traduction locale au niveau des épines dendritiques, contribuant ainsi à façonner la plasticité synaptique, l’apprentissage et la mémoire. Par ces fonctions, Arc s’inscrit dans des voies de signalisation dépendantes de l’activité et dans des programmes homéostatiques d’ajustement de l’échelle synaptique (synaptic scaling) qui modulent la neurotransmission excitatrice. Une expression dérégulée d’ARC ou un trafic dépendant d’Arc ont été impliqués dans des contextes de recherche en neuropsychiatrie et en neurodégénérescence, notamment dans des études portant sur les troubles cognitifs, la susceptibilité aux crises et des modifications de la densité synaptique.

Arc Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Arc Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Arc. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Arc au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Arc dans les cellules tumorales présentant une expression de ARC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.