Plasmide Double Nickase (h) apoL1: sc-403137-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) apoL1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide apoL1 Double Nickase (h) et le plasmide apoL1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant APOL1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: apoL1 Antibody (A-3): sc-390440
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) apoL1 | sc-403137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) apoL1 | sc-403137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APOL1 code l’apolipoprotéine L1 (apoL1), une protéine inductible par les interférons et liant les lipides, impliquée dans la défense immunitaire innée et les réponses au stress cellulaire. apoL1 se localise aux membranes intracellulaires et a été associée à la régulation du trafic vésiculaire, de l’autophagie et de l’homéostasie mitochondriale et lysosomale, avec des effets en aval sur les voies de survie cellulaire. Les variations génétiques d’APOL1 sont fortement associées à une susceptibilité accrue à des phénotypes de maladies rénales, ce qui motive des études mécanistiques dans les podocytes et d’autres types cellulaires rénaux. APOL1 est également étudié dans le contexte des interactions hôte–pathogène et des réseaux de signalisation inflammatoire qui modulent son expression et sa fonction.
apoL1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus APOL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de APOL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de APOL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de APOL1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.