Plasmide CRISPR d'Activation (h) apoC-III: sc-403887-ACT

L’APOC3 humain code l’apolipoprotéine C‑III (apoC‑III), une apolipoprotéine sécrétée qui module le métabolisme des lipoprotéines riches en triglycérides en limitant l’hydrolyse médiée par la lipoprotéine lipase et en retardant la clairance hépatique des particules résiduelles. Par ses effets sur le trafic des VLDL et des résidus de chylomicrons, l’apoC‑III influence les voies de transport des lipides et l’homéostasie énergétique systémique. Une expression altérée d’APOC3 est associée à des phénotypes de dyslipidémie caractérisés par une élévation des triglycérides plasmatiques et des modifications des profils de lipoprotéines athérogènes, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude de la biologie du risque cardiométabolique. Dans des modèles cellulaires, la régulation d’APOC3 peut être étudiée conjointement au contrôle transcriptionnel des programmes hépatiques de gestion des lipides et au traitement, par la voie sécrétoire, des apolipoprotéines.

apoC-III Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de APOC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

apoC-III Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus APOC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription APOC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de apoC-III. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus APOC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de apoC-III au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie apoC-III dans les cellules tumorales présentant une expression de APOC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.