Plasmide CRISPR d'Activation (m) apoC-I: sc-419163-ACT

Apoc1 chez la souris code l’apolipoprotéine C‑I (apoC‑I), une apolipoprotéine échangeable sécrétée qui s’associe aux lipoprotéines riches en triglycérides et aux HDL afin de moduler le transport des lipides et le remodelage des lipoprotéines. L’apoC‑I influence la clairance des lipoprotéines médiée par les récepteurs et affecte le métabolisme des triglycérides en modifiant les interactions entre apolipoprotéines, lipases et voies d’absorption à la surface cellulaire. Dans les macrophages et d’autres cellules myéloïdes, l’expression d’APOC1 est liée à des programmes de gestion des lipides qui façonnent la biologie des cellules spumeuses et la signalisation inflammatoire dans des contextes pertinents pour l’athérosclérose. Une dérégulation d’APOC1 a également été associée à des phénotypes métaboliques et à des états neuro-inflammatoires, ce qui étaye son utilisation dans des études sur l’homéostasie lipidique, l’activation de l’immunité innée et la régulation génique spécifique des tissus.

apoC-I Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Apoc1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

apoC-I Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Apoc1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Apoc1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de apoC-I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Apoc1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de apoC-I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie apoC-I dans les cellules tumorales présentant une expression de Apoc1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.