Plasmide CRISPR d'Activation (h) ANP: sc-400723-ACT

NPPA code le peptide natriurétique auriculaire (ANP), un facteur endocrinien d’origine cardiaque, synthétisé sous forme de préprohormone puis maturé afin de réguler le volume du liquide extracellulaire et le tonus vasculaire. L’ANP signale principalement via le récepteur A des peptides natriurétiques (NPR1/GC-A) pour augmenter le cGMP et activer des voies dépendantes de la PKG, lesquelles modulent la gestion rénale du sodium, la vasodilatation et l’équilibre neurohormonal. Dans les cardiomyocytes, l’expression de NPPA est régulée de façon dynamique par le stress mécanique et les programmes de remodelage, reliant l’ANP à la signalisation hypertrophique, à des réseaux transcriptionnels associés à la fibrose et à l’adaptation hémodynamique. Une activité NPPA/ANP altérée est fréquemment étudiée dans le contexte de l’insuffisance cardiaque, de l’hypertension et de phénotypes cardiométaboliques, où la signalisation des peptides natriurétiques et l’homéostasie du cGMP sont perturbées.

ANP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NPPA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NPPA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NPPA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NPPA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANP dans les cellules tumorales présentant une expression de NPPA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.