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Partículas Lentivirales de Activación (h) ANO2 | sc-404198-LAC | 200 µl | $455.00 |
El gen humano **ANO2** codifica la anoctamina 2 (TMEM16B), un canal de cloruro activado por calcio que regula la excitabilidad de la membrana y el flujo de cloruro en respuesta a señales intracelulares de Ca²⁺. La actividad de ANO2 contribuye a la transducción de señales dependiente de Ca²⁺, modulando la generación de potenciales de acción, el procesamiento de señales sensoriales y la dinámica secretora en tipos celulares especializados. Al modular la homeostasis iónica y las propiedades eléctricas, ANO2 se integra en vías que controlan la señalización neuronal y el transporte epitelial. La disfunción de canales de cloruro se ha asociado con fenotipos de excitabilidad alterada y es relevante para estudios de fisiología sensorial y mecanismos relacionados con canalopatías.
Las partículas de activación lentiviral ANO2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ANO2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral ANO2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ANO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ANO2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ANO2 y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.