Annexin V Double Nickaseプラスミド (h): sc-400836-NIC

ANXA5はアネキシンVをコードしており、アネキシンVはCa²⁺依存性のリン脂質結合タンパク質です。形質膜の内葉に存在するホスファチジルセリンに選択的に結合し、膜のリモデリングに伴って局在を変化させます。アネキシンVはカルシウムにより制御される膜トラフィッキング、ベシクル動態、細胞骨格の組織化に関与し、アポトーシス時のホスファチジルセリン外在化を示す分子指標として広く用いられています。膜–細胞骨格インターフェースでの機能を通じて、アネキシンVは細胞生存、炎症、凝固関連の膜表面を制御する経路と関連しています。ANXA5の発現異常やホスファチジルセリン露出の表現型は、がん生物学、自己免疫の文脈、血管関連メカニズムなどで研究されており、ストレス応答および細胞死シグナル伝達における機能的ハブとしての重要性が示唆されています。

Annexin V ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ANXA5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ANXA5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ANXA5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ANXA5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。