Plasmide CRISPR/Cas9 KO Amylase 1 (m): sc-419103
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Amylase 1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Amylase 1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Amylase Antibody (C-12): sc-514313
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Amylase 1 (m) | sc-419103 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Amy1** code l’amylase 1, une glycoside hydrolase sécrétée qui catalyse l’endohydrolyse des liaisons glycosidiques **α-1,4** de l’amidon et du glycogène afin de produire du maltose et des oligosaccharides. En contrôlant les toutes premières étapes de la digestion des glucides, AMY1 influence la disponibilité du glucose dans la lumière intestinale et la signalisation métabolique en aval, notamment les voies de détection des nutriments qui façonnent l’écologie épithéliale et microbienne. Des variations de l’activité amylasique ont été associées à la gestion des glucides alimentaires et ont été étudiées dans le contexte de phénotypes métaboliques tels que l’obésité et la résistance à l’insuline, ce qui étaye sa pertinence pour les interactions nutrition–métabolisme. Chez la souris, **Amy1** constitue un modèle maniable pour étudier la régulation des enzymes digestives, la biologie des protéines sécrétées et les effets gène–régime sur la physiologie systémique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Amylase 1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Amy1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Amy1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Amy1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Amylase 1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Amy1 pour l'étude de la signalisation de Amylase 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Amy1 essentiels à la fonction de Amylase 1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Amy1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Amylase 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Amylase 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Amy1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Amylase 1 plasmide HDR (m) et le Amylase 1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Amy1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Amy1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.