Partículas Lentivirales de Activación (h) AMPKβ1: sc-402952-LAC

PRKAB1 codifica la subunidad reguladora β1 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), un sensor central de energía que integra el estado celular de AMP/ATP para coordinar la homeostasis metabólica. AMPKβ1 contribuye al ensamblaje del heterotrímero, a la localización subcelular y a la unión al glucógeno, influyendo en el control posterior de la captación de glucosa, la oxidación de ácidos grasos, la autofagia y la inhibición de la señalización anabólica mediante vías como mTORC1. A través de estas funciones, AMPKβ1 ayuda a acoplar la disponibilidad de nutrientes y las respuestas al estrés con programas transcripcionales y posraduccionales que preservan el equilibrio energético. La desregulación de la señalización de AMPK y de los complejos asociados a PRKAB1 es relevante para la investigación sobre el remodelado metabólico en cáncer, la resistencia a la insulina y otros trastornos vinculados a una función mitocondrial alterada y al sensado de nutrientes.

Las partículas de activación lentiviral AMPKβ1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRKAB1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral AMPKβ1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRKAB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de AMPKβ1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRKAB1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.