Plasmide Double Nickase (h) Amelogenin: sc-403337-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Amelogenin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Amelogenin Double Nickase (h) et le plasmide Amelogenin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AMELY. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Amelogenin Antibody (F-11): sc-365284
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Amelogenin | sc-403337-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Amelogenin | sc-403337-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMELY code l’isoforme d’amélogénine du chromosome Y, une protéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui contribue à la biomineralisation de l’émail et au développement dentaire en régulant la nucléation et la croissance des cristaux d’hydroxyapatite ainsi que l’organisation de la matrice. L’amélogénine participe à l’assemblage de la matrice de l’émail et à sa maturation par traitement protéolytique au cours de l’amélogenèse, influençant les interactions épithélio-mésenchymateuses et les programmes de dépôt minéral. Des variations génétiques affectant l’expression ou la structure de l’amélogénine ont été associées à des défauts de formation de l’émail et à des phénotypes relevant du spectre de l’amélogenèse imparfaite, ce qui soutient sa pertinence pour la biologie du développement craniofacial et dentaire. Comme AMELY est lié au chromosome Y et étroitement apparenté à AMELX, il est également utile pour étudier la biologie des chromosomes sexuels et la régulation spécifique des paralogues dans des modèles odontogéniques.
Amelogenin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AMELY dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AMELY. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AMELY. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AMELY.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.