Ameloblastin Double Nickaseプラスミド (h): sc-403086-NIC

AMBNはアメロブラスチン（ameloblastin）をコードしており、これはアメロブラストで発現する分泌性のエナメル基質タンパク質です。アメロブラスチンは、細胞外基質の組織化、ミネラル沈着、ならびにアメロブラスト—基質界面での接着を調節することで、エナメル質形成に寄与します。さらにAMBNは、歯の形態形成の過程で、上皮細胞の極性、分化、基質リモデリングを協調させる発生プログラムに関与し、そのプロセシング産物は細胞—基質シグナル伝達に影響を及ぼし得ます。AMBN機能の破綻はエナメル質欠損やアメロブラストの挙動変化と関連し、またAMBNの発現異常は歯原性分化や関連病態の研究におけるマーカーとして用いられています。これらの特性により、AMBNは頭蓋顎顔面研究において、細胞外基質生物学、石灰化（ミネラリゼーション）過程、上皮—間葉相互作用を検討するための有用な遺伝子座です。

Ameloblastin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AMBN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AMBN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AMBNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AMBNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。