Plasmide CRISPR/Cas9 KO AMDHD2 (m): sc-434174

Présentation

Amdhd2 code l’amidohydrolase domain containing 2 (AMDHD2), une désacétylase cytosolique métallo-dépendante qui participe au métabolisme des amino-sucres en catalysant des étapes de désacétylation liées à l’utilisation de la N‑acétylglucosamine (GlcNAc). Par son rôle dans le traitement d’intermédiaires dérivés de la glucosamine, AMDHD2 peut influencer la détection des nutriments par la cellule et des voies associées au flux de l’hexosamine, lequel interfère avec la capacité de glycosylation et l’homéostasie métabolique. Une régulation altérée du métabolisme des amino-sucres a été associée à des modifications de la prolifération, des réponses au stress et des programmes de différenciation dans les cellules de mammifères. Dans des modèles murins, la perturbation de Amdhd2 constitue un point d’entrée génétique pour étudier comment le métabolisme lié à la GlcNAc contribue à la physiologie des tissus et à des phénotypes métaboliques pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AMDHD2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Amdhd2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Amdhd2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Amdhd2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AMDHD2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Amdhd2 pour l'étude de la signalisation de AMDHD2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Amdhd2 essentiels à la fonction de AMDHD2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Amdhd2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AMDHD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AMDHD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Amdhd2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AMDHD2 plasmide HDR (m) et le AMDHD2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Amdhd2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Amdhd2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.