Plasmide Double Nickase (h) ALPPL2: sc-401492-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ALPPL2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ALPPL2 Double Nickase (h) et le plasmide ALPPL2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALPPL2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ALPPL2 Antibody (9-YD35): sc-134255
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ALPPL2 | sc-401492-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ALPPL2 | sc-401492-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALPPL2 (phosphatase alcaline, de type placentaire 2) code une ectoenzyme ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI) de la famille des phosphatases alcalines, qui hydrolyse des monoesters phosphatés extracellulaires et peut influencer la disponibilité locale du phosphate. En tant que protéine de surface cellulaire, ALPPL2 est bien placée pour moduler le métabolisme péricellulaire des nucléotides/phosphates, la signalisation au niveau des microdomaines membranaires et des processus associés à la différenciation. Son expression est fréquemment étudiée comme marqueur de lignée ou associé aux tumeurs dans des contextes épithéliaux, où une activité de phosphatase alcaline altérée et la présentation d’antigènes de surface peuvent accompagner des changements de prolifération et d’état cellulaire. Ces caractéristiques font d’ALPPL2 une cible pertinente pour des études mécanistiques sur l’identité cellulaire, la fonction des enzymes membranaires et les programmes d’expression associés aux maladies.
ALPPL2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALPPL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALPPL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALPPL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALPPL2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.