Plasmide CRISPR/Cas9 KO ALPPL2 (h2): sc-401492-KO-2

Présentation

ALPPL2 code l’isoenzyme phosphatase alcaline de type placentaire 2, une ectoenzyme ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui hydrolyse les monoesters phosphatés à la surface cellulaire. En régulant la déphosphorylation de substrats extracellulaires, ALPPL2 peut influencer la disponibilité locale en phosphate, la signalisation au sein des microdomaines membranaires et des programmes associés à la différenciation, en particulier dans des contextes épithéliaux et liés aux cellules germinales. Son expression est fréquemment utilisée comme marqueur de certains états du développement, et une expression d’ALPPL2 altérée a été rapportée dans de multiples jeux de données liés au cancer. Ces caractéristiques font d’ALPPL2 une cible pertinente pour l’étude de l’identité cellulaire, de la biologie des enzymes de surface et du remodelage des voies de signalisation lors de la transformation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ALPPL2 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ALPPL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ALPPL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ALPPL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ALPPL2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ALPPL2 pour l'étude de la signalisation de ALPPL2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ALPPL2 essentiels à la fonction de ALPPL2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ALPPL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ALPPL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ALPPL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ALPPL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ALPPL2 plasmide HDR (h) et le ALPPL2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ALPPL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ALPPL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.