Plasmide CRISPR d'Activation (m) alpha Synuclein: sc-423051-ACT

Snca chez la souris code l’alpha‑synucléine, une protéine neuronale présynaptique qui régule le trafic des vésicules synaptiques, l’assemblage du complexe SNARE et la dynamique de libération des neurotransmetteurs. Grâce à ses interactions avec les membranes lipidiques et des protéines associées aux vésicules, l’alpha‑synucléine influence des voies de protéostasie, notamment l’activité du système ubiquitine‑protéasome et la fonction autophagie‑lysosome, et peut affecter l’homéostasie mitochondriale en situation de stress cellulaire. Des altérations de l’abondance, le mauvais repliement et l’agrégation de l’alpha‑synucléine sont associés à la neurodégénérescence et à la neuroinflammation, faisant de Snca une cible majeure pour des études mécanistiques sur la signalisation neuronale et le contrôle qualité des protéines. Les variations d’expression de Snca servent aussi à explorer les voies qui gouvernent le recyclage des vésicules, les réponses au stress oxydant et l’agrégation intracellulaire des protéines.

alpha Synuclein Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Snca sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

alpha Synuclein Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Snca dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Snca, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de alpha Synuclein. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Snca natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de alpha Synuclein au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie alpha Synuclein dans les cellules tumorales présentant une expression de Snca silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.