ALKBH2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407363-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ALKBH2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ALKBH2ダブルニカースプラスミド（h）およびALKBH2ダブルニカースプラスミド（h2）は、ALKBH2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ALKBH2 抗体 (C-9): sc-515789
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ALKBH2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407363-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALKBH2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-407363-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALKBH2 は Fe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼをコードし、1-メチルアデニンや 3-メチルシトシンを含むアルキル化 DNA 塩基損傷を直接修復して、正常なワトソン–クリック塩基対形成の回復を助けます。この活性は、複製を阻害する損傷を抑え、S 期における変異原性を低減することでゲノム安定性を支え、細胞の DNA 損傷応答および修復ネットワークの一部として機能します。ALKBH2 は内因性・外因性のアルキル化ストレス負荷の制御に関与するとされ、複製フォークの進行や染色体の完全性維持に影響する経路との関連が示唆されています。ALKBH2 を含む DNA 修復能の制御異常は、がん生物学やアルキル化剤に対する細胞感受性の文脈で研究されており、遺伝毒性ストレス応答の機序解析において重要な対象となっています。
ALKBH2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ALKBH2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ALKBH2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ALKBH2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ALKBH2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。