ALG2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410220

Descripción general

ALG2 codifica la alfa-1,3/1,6-manosiltransferasa 2, una enzima clave en la vía de glicosilación N ligada del retículo endoplásmico que prolonga los intermediarios de oligosacáridos unidos a lípidos durante las etapas tempranas del ensamblaje de glicanos. Al favorecer el correcto plegamiento de proteínas, el control de calidad y el tráfico a través de la vía secretora, ALG2 influye en la homeostasis del RE y en las redes de proteostasis. La alteración de pasos de la N-glicosilación puede perturbar la maduración de proteínas de membrana y secretadas, desencadenando estrés del RE y cambios en la señalización celular. Se han asociado variantes que afectan la función de ALG2 con trastornos congénitos de la glicosilación, lo que vincula a esta enzima con impactos a nivel sistémico en el desarrollo y la fisiología celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ALG2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ALG2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ALG2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ALG2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ALG2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ALG2 para la investigación de la señalización de ALG2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ALG2 críticos para la función de ALG2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ALG2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ALG2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ALG2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ALG2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ALG2 (h) y el plásmido HDR ALG2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ALG2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ALG2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.