Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 (h): sc-405313

Présentation

L’ALDH3A2 humaine (fatty aldehyde dehydrogenase, FALDH) est une enzyme dépendante du NAD qui oxyde les aldéhydes aliphatiques à chaîne moyenne et longue en leurs acides gras correspondants, limitant l’accumulation d’aldéhydes lipidiques réactifs générés au cours du métabolisme des lipides et du stress oxydatif. Elle constitue un élément clé du catabolisme des alcools gras et des sphingolipides, notamment dans la dégradation des aldéhydes gras issus du renouvellement des plasmalogènes et des lipides éther. En contrôlant la charge en aldéhydes, ALDH3A2 contribue à l’homéostasie des lipides membranaires et à l’équilibre rédox cellulaire. Des variants perte de fonction sont associés au syndrome de Sjögren–Larsson et sont étudiés dans le contexte des pathologies neurocutanées et de la toxicité cellulaire médiée par les lipides.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ALDH3A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ALDH3A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ALDH3A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ALDH3A2 pour l'étude de la signalisation de Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ALDH3A2 essentiels à la fonction de Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ALDH3A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ALDH3A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 plasmide HDR (h) et le Aldehyde dehydrogenase 3-A2/ALDH3A2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ALDH3A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ALDH3A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.