Plasmide Double Nickase (h) Akt3: sc-400028-NIC

AKT3 code la kinase sérine/thréonine Akt3, un effecteur central de la signalisation PI3K–AKT qui intègre les signaux des facteurs de croissance et des nutriments pour réguler la survie cellulaire, la prolifération, le métabolisme du glucose et des programmes biosynthétiques liés à mTOR. L’activité d’Akt3 influence des cibles en aval, notamment les facteurs de transcription FOXO, GSK3, TSC2 et BAD, modulant ainsi la résistance à l’apoptose, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress cellulaire. En biologie humaine, AKT3 joue des rôles importants dans le développement du système nerveux et l’homéostasie neuronale, et une dérégulation de la signalisation AKT3 a été impliquée dans le remodelage de voies de signalisation associé au cancer et dans des troubles du neurodéveloppement. Ces liens de voie font d’AKT3 un nœud utile pour des études mécanistiques de la transduction du signal, du contrôle de la croissance spécifique de lignée et de vulnérabilités dépendantes du contexte.

Akt3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AKT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AKT3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AKT3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AKT3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.