AK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407286-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AK1 Double Nickase Plasmid (h) e il AK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AK1 Antibody (E-8): sc-365316
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407286-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407286-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’adenilato chinasi 1 (AK1) è una fosfotransferasi citosolica che mantiene l’omeostasi dei nucleotidi adenilici catalizzando la conversione reversibile di ATP e AMP in due molecole di ADP, sostenendo un rapido buffering energetico nelle cellule con richieste energetiche variabili. Modulando i rapporti locali ATP/ADP/AMP, AK1 influenza punti di controllo metabolici collegati alla glicolisi, alla fosforilazione ossidativa e alla segnalazione sensibile all’AMP, inclusa l’interazione con le risposte cellulari allo stress energetico. L’attività di AK1 è particolarmente rilevante nei tessuti con elevato flusso energetico, come il muscolo e gli eritrociti, dove alterazioni dell’equilibrio dei nucleotidi possono compromettere la contrattilità e la stabilità dei globuli rossi. Le variazioni nell’espressione o nella funzione di AK1 sono state esaminate in relazione a fenotipi metabolici e a disturbi legati alla disregolazione energetica, offrendo un punto di accesso meccanicistico per studiare il metabolismo dei nucleotidi nelle cellule umane.
AK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.