Plasmide CRISPR/Cas9 KO AIP5 (h): sc-403772

Présentation

WWP1 code pour l’E3 ubiquitine‑ligase de type HECT AIP5, une enzyme régulatrice qui catalyse le transfert d’ubiquitine vers des substrats protéiques afin de contrôler leur stabilité, leur localisation et leur activité de signalisation. AIP5 participe à la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et peut influencer des cascades de signalisation des récepteurs et des kinases, des programmes transcriptionnels et des réponses au stress cellulaire via le renouvellement sélectif de substrats. En modulant le contrôle qualité des protéines et les seuils de signalisation, l’activité de WWP1 a été associée dans la littérature à des phénotypes cellulaires liés à la prolifération, à la différenciation et à l’homéostasie épithéliale. La dérégulation des voies d’ubiquitine‑ligases impliquant WWP1 a été reliée à des mécanismes pertinents pour la maladie, notamment une transduction du signal altérée et des réseaux anormaux de dégradation protéique, étudiés en oncologie et dans d’autres troubles complexes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AIP5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WWP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WWP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WWP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AIP5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WWP1 pour l'étude de la signalisation de AIP5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WWP1 essentiels à la fonction de AIP5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WWP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AIP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AIP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WWP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AIP5 plasmide HDR (h) et le AIP5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WWP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WWP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.