Plasmide Double Nickase (m) AIF: sc-424143-NIC

Le gène murin **Aifm1** code le **facteur inducteur d'apoptose (AIF)**, une flavoprotéine localisée principalement dans l'espace intermembranaire mitochondrial, qui soutient la phosphorylation oxydative et l'homéostasie rédox. En cas de stress cellulaire sévère, l'AIF peut se transloquer vers le noyau et favoriser une condensation de la chromatine indépendante des caspases ainsi qu'une fragmentation de l'ADN à grande échelle, reliant le dysfonctionnement mitochondrial aux programmes de mort cellulaire régulée. Par ces fonctions, l'AIF s'inscrit au carrefour du contrôle qualité mitochondrial, de la signalisation par les espèces réactives de l'oxygène et des voies bioénergétiques qui influencent la survie neuronale, l'intégrité musculaire et l'homéostasie des cellules immunitaires. La dérégulation des processus associés à l'AIF est pertinente pour l'étude de la neurodégénérescence, des encéphalomyopathies mitochondriales, des modèles de lésions ischémiques et de la physiopathologie inflammatoire chez la souris.

AIF Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Aifm1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Aifm1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Aifm1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Aifm1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.