Plasmide Double Nickase (h) AHRR: sc-412812-NIC

L’AHRR humain (aryl-hydrocarbon receptor repressor) code un régulateur transcriptionnel inductible par ligand qui atténue la signalisation de l’AHR par inhibition de rétroaction, façonnant le métabolisme des xénobiotiques et les réponses cellulaires au stress. En entrant en compétition pour ARNT et en recrutant des complexes corépresseurs, AHRR module des programmes transcriptionnels liés à l’induction de la famille CYP1, au stress oxydatif et à l’expression de gènes inflammatoires. L’activité d’AHRR s’articule avec des voies qui régissent la différenciation épithéliale, la modulation immunitaire et la réponse à l’environnement, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier comment des réseaux transcriptionnels sensibles aux expositions contribuent à des phénotypes associés aux maladies. Une régulation altérée d’AHRR et son statut de méthylation ont été associés à des signatures transcriptionnelles liées aux expositions et ont été étudiés dans des contextes incluant la biologie du cancer, les mécanismes des maladies pulmonaires et la dérégulation immunitaire.

AHRR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AHRR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AHRR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AHRR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AHRR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.