AHNAK Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425992-LAC

Ahnak codifica AHNAK, una grande proteina scaffold che si associa alla membrana plasmatica e al citoscheletro per coordinare l’architettura cellulare, l’adesione e l’integrazione dei segnali. Nelle cellule murine, AHNAK è stata collegata alla gestione del calcio e ai processi di riparazione della membrana, e può modulare vie di segnalazione che convergono sul rimodellamento del citoscheletro, incluse quelle associate a PKC e TGF-β. Attraverso queste funzioni, AHNAK contribuisce alla regolazione della migrazione e della differenziazione cellulare, risultando pertinente per studi sul rimodellamento tissutale e sulle risposte allo stress. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di AHNAK sono state riportate in molteplici contesti patologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per analizzare le relazioni tra segnalazione e struttura in modelli di ricerca biomedica.

Le particelle di attivazione lentivirale AHNAK (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ahnak in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale AHNAK (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ahnak, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di AHNAK. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ahnak e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.