AGAP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409504-ACT

AGAP1 (ArfGAP com domínio de GTPase, repetição de anquirina e domínio PH 1) é uma proteína ativadora de GTPase de ARF que coordena o tráfego de membranas e a dinâmica do citoesqueleto ao regular a formação de vesículas dependente de ARF e o transporte endossomal. Por meio de seus domínios PH e de repetições de anquirina, a AGAP1 conecta a sinalização por fosfoinositídeos ao direcionamento mediado por adaptadores, influenciando a reciclagem de receptores, o crescimento de neuritos e a remodelação de actina. Alterações na expressão ou na função de AGAP1 têm sido associadas à desregulação de vias endocíticas e de processos sinápticos, tornando-a relevante para estudos de fenótipos do neurodesenvolvimento e da homeostase celular. Suas funções em endossomos e na membrana plasmática também se cruzam com redes de sinalização que dependem da disponibilidade de receptores e de reservatórios de fosfoinositídeos espacialmente restritos.

AGAP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AGAP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AGAP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AGAP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AGAP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AGAP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AGAP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AGAP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AGAP1 em células tumorais com expressão de AGAP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.