Plasmide Double Nickase (h) AFP/Alpha fetoprotein: sc-400355-NIC

AFP code l'alpha‑foetoprotéine, une glycoprotéine sécrétée fortement exprimée au cours du développement fœtal et normalement réprimée après la naissance dans la plupart des tissus. L'AFP est associée aux programmes de différenciation des hépatocytes et au basculement transcriptionnel du stade fœtal au stade adulte, et sa réexpression reflète une régulation génique altérée dans des contextes hépatiques et de cellules germinales. En biologie du cancer, l'AFP est largement utilisée comme marqueur moléculaire associé au carcinome hépatocellulaire et à certaines tumeurs germinales, ce qui soutient l'étude de l'état cellulaire tumoral, de l'identité de lignée et des réseaux transcriptionnels oncogéniques. En tant qu'antigène circulant et associé aux tumeurs, l'AFP sert également d'indicateur pour explorer la dynamique de la voie sécrétoire et les modifications de la production protéique liées au stress.

AFP/Alpha fetoprotein Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AFP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AFP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AFP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AFP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.