AdSS2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419031

Panoramica

Adss codifica l’adenilosuccinato sintetasi 2 (AdSS2), un enzima chiave della biosintesi de novo delle purine che catalizza la conversione dell’IMP in adenilosuccinato, sostenendo la produzione di AMP e l’equilibrio dei nucleotidi cellulari. Controllando la disponibilità dei nucleotidi adenilici, AdSS2 influenza la sintesi di DNA/RNA, il metabolismo energetico e la capacità proliferativa, e si integra con programmi metabolici che collegano il flusso delle purine alla progressione del ciclo cellulare. Le alterazioni degli enzimi della biosintesi delle purine sono associate a fenotipi di crescita modificati e a risposte allo stress, rendendo AdSS2 rilevante per studi sulla riprogrammazione metabolica nella biologia del cancro e in altri contesti in cui la richiesta di nucleotidi è elevata. Nei modelli murini, Adss rappresenta un nodo sperimentale maneggevole per analizzare come l’apporto di purine limiti la biosintesi e le vie di segnalazione dipendenti dai nucleotidi adenilici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AdSS2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adss in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adss insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adss a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AdSS2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adss per lo studio della segnalazione di AdSS2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adss critici per la funzione di AdSS2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adss per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AdSS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AdSS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adss. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AdSS2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AdSS2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adss per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adss definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.