Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADK (m): sc-419008

Présentation

Le gène murin *Adk* code l’adénosine kinase (ADK), une enzyme cytosolique clé qui phosphoryle l’adénosine en AMP et contribue au maintien de l’homéostasie de l’adénosine ainsi que des réserves de nucléotides adényliques. En régulant les niveaux d’adénosine intra- et extracellulaires, l’ADK influence la signalisation purinergique, le métabolisme énergétique et le potentiel de méthylation via ses effets sur le cycle S-adénosylméthionine/S-adénosylhomocystéine. L’activité de l’ADK est liée au contrôle des réponses cellulaires au stress et de la signalisation inflammatoire, et des altérations du métabolisme de l’adénosine ont été associées, dans des modèles expérimentaux, à des dysfonctionnements neurologiques, à une susceptibilité aux crises et à des contextes de lésions tissulaires. En tant que « gardien » métabolique, l’ADK est fréquemment étudiée dans des voies reliant le recyclage des nucléotides, la régulation épigénétique et l’adaptation immunométabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADK (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adk dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adk, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adk à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adk pour l'étude de la signalisation de ADK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adk essentiels à la fonction de ADK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adk pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ADK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adk. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADK plasmide HDR (m) et le ADK (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adk pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adk définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.