Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADH7 (m2): sc-419006-KO-2

Présentation

Adh7 code l’alcool déshydrogénase 7 (ADH7), une oxydoréductase dépendante du NAD qui contribue au métabolisme des rétinoïdes ainsi que d’un large éventail de substrats alcooliques et aldéhydiques, influençant ainsi l’équilibre rédox cellulaire et la capacité de détoxification. Dans les tissus de souris où elle est exprimée, l’activité d’ADH7 peut intervenir dans les étapes de conversion du rétinol en rétinal qui alimentent la signalisation de l’acide rétinoïque, une voie centrale pour les programmes de différenciation et l’homéostasie épithéliale. Des altérations de la prise en charge des aldéhydes et du métabolisme des rétinoïdes sont fréquemment associées aux réponses au stress oxydatif et à une dérégulation du contrôle de la croissance, faisant d’Adh7 un point d’entrée utile pour étudier les contributions métaboliques au remodelage tissulaire et à des phénotypes pertinents pour les maladies. Comme le métabolisme des alcools/aldéhydes influence également la signalisation lipidique et inflammatoire, la perturbation d’Adh7 peut être exploitée pour sonder les interactions entre enzymes métaboliques et programmes transcriptionnels en aval des réseaux régulés par les rétinoïdes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADH7 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adh7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adh7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adh7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADH7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adh7 pour l'étude de la signalisation de ADH7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adh7 essentiels à la fonction de ADH7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adh7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADH7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ADH7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adh7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADH7 plasmide HDR (m) et le ADH7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adh7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adh7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.