Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADH5: sc-403859-ACT

L’ADH5 humaine code l’alcool déshydrogénase 5 (également appelée réductase de la S‑nitrosoglutathion, GSNOR), une déshydrogénase dépendante du NAD qui contrôle la détoxification cellulaire du formaldéhyde et la bioactivité de l’oxyde nitrique en métabolisant la S‑nitrosoglutathion. En régulant la S‑nitrosylation des protéines et l’équilibre rédox, ADH5 influence les voies de signalisation de la réponse au stress, la fonction mitochondriale et des mécanismes liés à l’inflammation et aux dommages à l’ADN. Une activité altérée d’ADH5 a été associée à une dérégulation du stress nitrosatif et à une clairance insuffisante des aldéhydes, des processus impliqués dans la biologie cardiopulmonaire, la signalisation immunitaire et l’adaptation rédox pertinente en cancérologie. En conséquence, ADH5 est fréquemment étudiée dans des modèles de lésions oxydatives/nitrosatives, de signalisation pilotée par le métabolisme et de stabilité du génome sous stress aldéhydique.

ADH5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADH5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADH5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADH5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADH5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADH5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADH5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADH5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADH5 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADH5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.