Plasmide CRISPR/Cas9 KO Adh1 (m): sc-419005

Présentation

Adh1 code pour l’alcool déshydrogénase 1, une oxydoréductase cytosolique qui catalyse l’interconversion, dépendante du NAD+/NADH, des alcools et aldéhydes à chaîne courte, contribuant à l’équilibre rédox cellulaire et au métabolisme intermédiaire. Dans les tissus murins, l’activité d’ADH1 participe au métabolisme de l’alcool et des xénobiotiques et s’articule avec des voies contrôlant la détoxification des aldéhydes, les réponses au stress oxydant et l’homéostasie des lipides et des composés carbonylés. Une perturbation de la prise en charge des alcools/aldéhydes est pertinente dans des modèles de lésion hépatique, d’inflammation et de dysfonction métabolique, où des rapports NADH/NAD+ modifiés et l’accumulation d’aldéhydes réactifs peuvent influencer la fonction mitochondriale et la signalisation. En tant qu’enzyme métabolique à large spécificité de substrat, Adh1 est fréquemment étudié dans des travaux portant sur la capacité de détoxification et l’adaptation métabolique spécifique aux tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Adh1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adh1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adh1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adh1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Adh1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adh1 pour l'étude de la signalisation de Adh1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adh1 essentiels à la fonction de Adh1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adh1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Adh1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Adh1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adh1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Adh1 plasmide HDR (m) et le Adh1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adh1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adh1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.