Plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 (m): sc-418999

Présentation

Adcy9 code l’adénylate cyclase 9 (AC9/ADCY9), une enzyme associée à la membrane qui convertit l’ATP en AMPc en réponse à des signaux couplés aux RCPG, modulant une dynamique compartimentée des seconds messagers. L’AMPc produit par AC9 régule des voies dépendantes de la protéine kinase A et d’EPAC, qui influencent les réseaux de phosphorylation, la transcription génique, le transport ionique et l’adaptation métabolique. Dans les cellules de souris, l’activité d’ADCY9 contribue à des réponses de signalisation spécifiques au stimulus et à des interactions (cross-talk) avec des processus médiés par le calcium et les protéines G. Une signalisation de l’AMPc dérégulée et une fonction d’ADCY9 altérée ont été associées à des phénotypes pertinents pour la régulation cardiométabolique, la biologie des voies aériennes et des circuits neurocomportementaux, faisant d’Adcy9 un nœud utile pour des études mécanistiques de transduction du signal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adcy9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adcy9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adcy9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adcy9 pour l'étude de la signalisation de Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adcy9 essentiels à la fonction de Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adcy9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adcy9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 plasmide HDR (m) et le Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adcy9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adcy9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.