Plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 10/ADCY10 (h): sc-406235

Présentation

ADCY10 code l’adénylate cyclase 10 (adénylate cyclase soluble, sAC), une enzyme intracellulaire qui produit de l’AMPc cyclique en réponse à des signaux de bicarbonate et de calcium, plutôt qu’à l’activation de récepteurs couplés aux protéines G. En structurant des microdomaines d’AMPc, ADCY10 module les voies de signalisation PKA et EPAC, influençant des processus tels que la fonction mitochondriale, le transport ionique, la capacitation des spermatozoïdes et les réponses de détection du pH. L’AMPc issu de la sAC intègre des signaux métaboliques et d’équilibre acido-basique aux réseaux de phosphorylation, avec des effets sur les programmes transcriptionnels et l’adaptation cellulaire au stress. Une activité dérégulée d’ADCY10 a été étudiée dans des contextes incluant l’infertilité masculine, la gestion rénale et respiratoire du bicarbonate, ainsi que le remodelage de la signalisation AMPc associé aux tumeurs, soulignant sa pertinence pour des études mécanistiques de voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 10/ADCY10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADCY10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADCY10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADCY10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Adenylate cyclase 10/ADCY10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADCY10 pour l'étude de la signalisation de Adenylate cyclase 10/ADCY10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADCY10 essentiels à la fonction de Adenylate cyclase 10/ADCY10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADCY10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Adenylate cyclase 10/ADCY10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Adenylate cyclase 10/ADCY10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADCY10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Adenylate cyclase 10/ADCY10 plasmide HDR (h) et le Adenylate cyclase 10/ADCY10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADCY10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADCY10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.