Plasmide CRISPR d'Activation (h) Adenosine A2B-R: sc-401402-ACT

ADORA2B code le récepteur humain de l’adénosine A2B (A2B‑R), un récepteur couplé aux protéines G de faible affinité, induit en situation d’hypoxie et de stress inflammatoire, lorsque l’adénosine extracellulaire s’accumule. A2B‑R signale principalement via Gs pour augmenter l’AMPc et peut aussi se coupler à Gq pour mobiliser le calcium intracellulaire, activant des programmes en aval tels que PKA/CREB, MAPK/ERK et la voie PI3K. Par ces voies, ADORA2B module la fonction de barrière endothéliale, les réponses angiogéniques et fibrotiques, ainsi que la production de cytokines dans les compartiments immunitaires et stromaux. Une activité dérégulée d’ADORA2B a été associée à des états inflammatoires chroniques, au remodelage tissulaire induit par l’hypoxie et à la signalisation du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude de la signalisation des récepteurs et de la biologie du microenvironnement.

Adenosine A2B-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADORA2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Adenosine A2B-R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADORA2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADORA2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Adenosine A2B-R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADORA2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Adenosine A2B-R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Adenosine A2B-R dans les cellules tumorales présentant une expression de ADORA2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.