Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADAMTS-L2: sc-411325-ACT

ADAMTSL2 code ADAMTS‑L2, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire appartenant à la famille des protéines de type ADAMTS, dépourvue d’activité protéase catalytique, mais capable de moduler l’organisation de la matrice et la signalisation cellule–matrice. ADAMTS‑L2 participe à la biologie des microfibrilles extracellulaires et est fonctionnellement liée à la régulation du transforming growth factor‑β (TGF‑β) via des interactions avec des matrices riches en fibrilline, influençant l’architecture tissulaire et l’homéostasie mécanique. Une expression ou une fonction altérée d’ADAMTSL2 est associée à des phénotypes du tissu conjonctif et à un remodelage matriciel dérégulé, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de programmes de type fibrotique, de la morphogenèse du développement et de la biologie des cellules stromales. Sa localisation extracellulaire favorise également l’exploration de la signalisation paracrine, du dépôt de matrice et des dynamiques de remodelage dans des systèmes de cellules humaines et d’organoïdes.

ADAMTS-L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAMTSL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAMTS-L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAMTSL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAMTSL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAMTS-L2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAMTSL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAMTS-L2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAMTS-L2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAMTSL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.